Chromatic™ MH – Mueller Hinton chromogen für mikrobiologische Differenzierung und Antibiogramm

Beschreibung
Chromatic™ MH ist ein chromogenes Medium auf Mueller Hinton-Basis, das zur mikrobiologischen Differenzierung gleichzeitig mit dem Antibiogramm für verschiedene Mikroorganismen direkt aus klinischen Proben verwendet wird. Das Antibiogramm ist für gramnegative Bakterien optimiert.

Typische Formel (g/l)

Fleischextrakt 2.0
Säurehydrolysiertes Kasein 17.5
Stärke 1.5
Chromogene Mischung 0.5
Agar 17.0
End-pH 7.3 ± 0.2 bei 25°C

Prinzip der Methode

Das säurehydrolysierte Kasein und der Fleischextrakt liefern Aminosäuren, Stickstoff, Kohlenstoff, Mineralien, Vitamine und andere essentielle Nährstoffe für das Wachstum der Mikroorganismen. Die Stärke wirkt als schützendes Kolloid gegen toxische Moleküle und liefert durch ihre Hydrolyse im Autoklaven eine kleine Menge Glukose als Energiequelle.

Die chromogene Mischung ermöglicht die Identifizierung von Mikroorganismen anhand der Farbe und Morphologie der Kolonien. Agar wirkt als Festigungsmittel.

Die Kirby-Bauer-Methode basiert auf der Diffusion des Antimikrobiotikums durch den Agar. Jede Papierdiskette enthält eine spezifische Konzentration des Antimikrobiotikums, das das Wachstum des Mikroorganismus hemmt und einen Halo um die Diskette bildet. Der Durchmesser des Hemmhals ist mit der minimalen Hemmkonzentration (MHK) korreliert.

Die Streifenmethode mit Gradienten ist eine quantitative Analyse zur Bestimmung der MHK eines Antimikrobiotikums und zur Identifizierung von Resistenzmechanismen. Der Streifen enthält einen exponentiellen Gradienten des Antimikrobiotikums und wird auf die Oberfläche der inokulierten Platte gelegt. Der MHK-Wert wird dort abgelesen, wo der Rand der Hemmellipse den Streifen schneidet.

Chromatic™ MH Agar ist mit niedrigen Thymidin- und Thymidinspiegeln sowie kontrollierten Calcium- und Magnesiumionen formuliert.

Vorbereitung

Für das dehydrierte Medium 38.5 g Pulver in 1 Liter steriler destillierter oder deionisierter Wasser suspendieren, gut mischen und erhitzen, bis es vollständig gelöst ist. Sterilisation im Autoklaven bei 121°C für 15 Minuten, abkühlen auf 45-50°C und in Petrischalen unter aseptischen Bedingungen abfüllen.

Testverfahren

Die Platte inokulieren, indem direkt 10 µl Probe auf die Oberfläche des Agars aufgetragen werden. Falls nötig, die Probe in physiologischer Lösung verdünnen und vor der Aussaat mit einem Vortex mischen.
Antimikrobielle Scheiben oder MIC-Teststreifen auf die Oberfläche der inokulierten Platte auftragen.
Bei 37°C für 18-24 Stunden in aerobischer Atmosphäre inkubieren.

Interpretation der Ergebnisse

Nach der Inkubation die Farbe der Kolonien beobachten und die Ergebnisse anhand der ID-Tabelle interpretieren.

Mikroorganismen und typische Farben der Kolonien:
E. coli rosa-rot-malve
Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp grün-blau
Proteus spp braun
Pseudomonas spp gelb-grün
S. aureus creme
E. faecalis grün-türkis

Für das Antibiogramm den Durchmesser des Hemmhalses um die Diskette messen oder den MHK-Wert ablesen. Die Durchmesser der Hemmhals oder die MHK-Werte gemäß den aktuellen Standards interpretieren und den Mikroorganismus als empfindlich, intermediär oder resistent gegenüber den getesteten Mitteln klassifizieren.

Aussehen und Lagerung

Dehydriertes Medium: fein, trocken, homogen, beige
Vorbereitetes Medium: bernsteinfarben, leicht opaleszent

Das Pulver ist hochgradig hygroskopisch und sollte bei 10-30°C in einer trockenen Umgebung im original verschlossenen Behälter aufbewahrt werden. Die fertigen Platten sollten bei 2-8°C lichtgeschützt gelagert werden. Das Produkt nach dem Ablaufdatum oder bei Anzeichen von Kontamination oder Verderb nicht verwenden.

Haltbarkeit

Dehydriertes Medium: 4 Jahre
Fertige Platten: 4 Monate

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