Chromatic™ MH – Mueller Hinton chromogénique pour la différenciation microbienne et antibiogramme

Description
Chromatic™ MH est un milieu chromogénique à base de Mueller Hinton utilisé pour la différenciation microbienne en même temps que l'antibiogramme pour divers micro-organismes directement à partir d'échantillons cliniques. L'antibiogramme est optimisé pour les bactéries Gram négatives.

Formule typique (g/l)

Extrait de viande 2.0
Hydrolysat acide de caséine 17.5
Amidon 1.5
Mélange chromogénique 0.5
Agar 17.0
pH final 7.3 ± 0.2 à 25°C

Principe de la méthode

L'hydrolysat acide de caséine et l'extrait de viande fournissent des acides aminés, de l'azote, du carbone, des minéraux, des vitamines et d'autres nutriments essentiels à la croissance des micro-organismes. L'amidon agit comme un colloïde protecteur contre les molécules toxiques et, avec son hydrolyse en autoclave, fournit une petite quantité de glucose comme source d'énergie.

Le mélange chromogénique permet d'identifier les micro-organismes en fonction de la couleur et de la morphologie des colonies. L'agar agit comme agent solidifiant.

La méthode Kirby-Bauer repose sur la diffusion de l'antimicrobien à travers l'agar. Chaque disque de papier contient une concentration spécifique d'agent antimicrobien, qui inhibe la croissance du micro-organisme en formant une zone autour du disque. Le diamètre de la zone d'inhibition est corrélé à la concentration minimale inhibitrice (CMI).

La méthode Strip avec Gradient est une analyse quantitative pour la détermination de la CMI d'un agent antimicrobien et pour l'identification des mécanismes de résistance. La bande contient un gradient exponentiel de l'agent antimicrobien et est placée sur la surface de la plaque inoculée. La valeur de CMI est lue là où le bord de l'ellipse d'inhibition croise la bande.

Chromatic™ MH Agar est formulé avec de faibles niveaux de thymine et de timidines et des niveaux contrôlés d'ions calcium et magnésium.

Préparation

Pour le milieu déshydraté, dissoudre 38.5 g de poudre dans 1 litre d'eau distillée ou déionisée stérile, bien mélanger et chauffer jusqu'à dissolution complète. Stériliser en autoclave à 121°C pendant 15 minutes, refroidir à 45-50°C et distribuer dans des plaques de Petri dans des conditions d'asepsie.

Procédure du test

Inoculer la plaque en étalant directement 10 µl d'échantillon sur la surface de l'agar. Si nécessaire, diluer l'échantillon dans une solution saline et mélanger par vortex avant la semence.
Appliquer les disques antimicrobiens ou les bandes de test CMI sur la surface de la plaque inoculée.
Incuber à 37°C pendant 18-24 heures en atmosphère aérobie.

Interprétation des résultats

Après l'incubation, observer la couleur des colonies et interpréter les résultats en fonction du tableau ID.

Micro-organismes et couleur typique des colonies:
E. coli rose-rouge-mauve
Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp vert-bleu
Proteus spp marron
Pseudomonas spp jaune-vert
S. aureus crème
E. faecalis vert-turquoise

Pour l'antibiogramme, mesurer le diamètre de la zone d'inhibition autour du disque ou lire la valeur de CMI. Interpréter les diamètres des zones d'inhibition ou les valeurs de CMI selon les normes actuelles et classer le micro-organisme comme sensible, intermédiaire ou résistant aux agents testés.

Aspect et conservation

Milieu déshydraté: fin, sec, homogène, beige
Milieu préparé: ambre, légèrement opalescent

La poudre est hautement hygroscopique et doit être conservée à 10-30°C dans un environnement sec, dans le conteneur d'origine hermétiquement fermé. Les plaques prêtes à l'emploi doivent être conservées à 2-8°C à l'abri de la lumière. Ne pas utiliser le produit après la date d'expiration ou s'il présente des signes de contamination ou de détérioration.

Durée

Milieu déshydraté: 4 ans
Plaques prêtes à l'emploi: 4 mois

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